仪器配置
MoFlo
XDP 有三个激光器:355nm、488nm、640nm。
488nm激光器可以检测5个荧光:529nm、575nm、620nm、670nm、785nm。
355nm激光器可以检测2个荧光:457nm和630nm。
640nm激光器可以检测2个荧光:670nm和720nm。
(请大家根据仪器配置的激光和荧光通道来选择合适的荧光染料)
二、样本制备
1. 细胞密度。MoFlo分选速度较一般仪器快,建议每个样本浓度要求在1~5X107,稀有样本除外。
2. 样本体积。最小体积200ul。
3. 首次做荧光分选,要准备未染色的样本、同型对照、每一种荧光的单染对照、及待分选的细胞。
4. 待分选的细胞用无血清培养基悬浮。分选前一定要用细胞筛过滤。
5. 接收细胞可以用1.5ml tube、5ml试管、各种规格培养皿、多孔培养板及96孔板。容器中加入完全培养基和/或血清,防止细胞破碎。
6. 所有的实验用品、试剂以及仪器本身等,都应做灭菌处理。接收器除了加入培养基和/或血清,还要加入适量的抗生素。
7. 充足的细胞:真正参与分选活动的活细胞大约只占初始细胞总量的一半。根据目标细胞在样本中占的比例,计算出必要的细胞总数,要比计算的细胞总数多出2~3倍,才能保证得到回收的细胞数量。
8. 接收的细胞如果要离心,建议使用离心力1500g。
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