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流式分选指南

仪器配置

MoFlo XDP 有三个激光器:355nm488nm640nm

488nm激光器可以检测5个荧光:529nm575nm620nm670nm785nm

355nm激光器可以检测2个荧光:457nm630nm

640nm激光器可以检测2个荧光:670nm720nm

 

(请大家根据仪器配置的激光和荧光通道来选择合适的荧光染料)

二、样本制备

1.   细胞密度。MoFlo分选速度较一般仪器快,建议每个样本浓度要求在15X107,稀有样本除外。

2.        样本体积。最小体积200ul

3.        首次做荧光分选,要准备未染色的样本、同型对照、每一种荧光的单染对照、及待分选的细胞。

4.        待分选的细胞用无血清培养基悬浮。分选前一定要用细胞筛过滤。

5.        接收细胞可以用1.5ml tube5ml试管、各种规格培养皿、多孔培养板及96孔板。容器中加入完全培养基和/或血清,防止细胞破碎。

6.        所有的实验用品、试剂以及仪器本身等,都应做灭菌处理。接收器除了加入培养基和/或血清,还要加入适量的抗生素。

7.        充足的细胞:真正参与分选活动的活细胞大约只占初始细胞总量的一半。根据目标细胞在样本中占的比例,计算出必要的细胞总数,要比计算的细胞总数多出23倍,才能保证得到回收的细胞数量。

8.         接收的细胞如果要离心,建议使用离心力1500g

 



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